Riċerkaturi Olandiżi jgħaqqdu CRISPR u bijoluminixxenza f'test sperimentali għalmard infettiv

Proteina matul il-lejl żviluppata ġdida tista 'tħaffef u tissimplifika d-dijanjosi ta' mard virali, skond riċerkaturi fl-Olanda.
L-istudju tagħhom, ippubblikat l-Erbgħa f'Pubblikazzjonijiet ACS, jiddeskrivi metodu sensittiv u ta 'pass wieħed għall-analiżi rapida ta' l-aċidi nuklejċi virali u d-dehra tagħhom bl-użu ta 'proteini blu jew ħodor li jleqqu.
L-identifikazzjoni tal-patoġeni billi jinstabu l-marki tas-swaba' tal-aċidu nuklejku tagħhom hija strateġija ewlenija fid-dijanjostika klinika, ir-riċerka bijomedika, u l-monitoraġġ tas-sikurezza tal-ikel u ambjentali.It-testijiet tar-reazzjoni tal-katina tal-polimerażi kwantitattiva (PCR) użati ħafna huma sensittivi ħafna, iżda jeħtieġu preparazzjoni sofistikata tal-kampjun jew interpretazzjoni tar-riżultati, li jagħmluhom imprattikabbli għal xi settings tal-kura tas-saħħa jew settings limitati bir-riżorsi.
Dan il-grupp mill-Olanda huwa r-riżultat ta 'kollaborazzjoni bejn xjenzati minn universitajiet u sptarijiet biex jiżviluppaw metodu dijanjostiku ta' aċidu nuklejku veloċi, portabbli u faċli biex jintuża li jista 'jiġi applikat f'varjetà ta' settings.
Kienu ispirati minn fwawar, tiddi tal-firefly, u stilel ċkejkna tal-fitoplankton akkwatiku, kollha mħaddma minn fenomenu msejjaħ bijoluminixxenza.Dan l-effett glow-in-the-dlam huwa kkawżat minn reazzjoni kimika li tinvolvi l-proteina luciferase.Ix-xjentisti inkorporaw proteini luciferase f'sensors li jarmu d-dawl biex jiffaċilitaw l-osservazzjoni meta jsibu mira.Filwaqt li dan jagħmel dawn is-sensuri ideali għall-iskoperta fil-punt tal-kura, bħalissa m'għandhomx is-sensittività għolja meħtieġa għal testijiet dijanjostiċi kliniċi.Filwaqt li l-metodu ta 'editjar tal-ġeni CRISPR jista' jipprovdi din il-kapaċità, jeħtieġ ħafna passi u tagħmir speċjalizzat addizzjonali biex jiskopri s-sinjal dgħajjef li jista 'jkun preżenti f'kampjuni kumplessi u storbjużi.
Ir-riċerkaturi sabu mod kif jgħaqqdu proteina relatata ma’ CRISPR ma’ sinjal bijoluminixxenti li jista’ jiġi skopert b’kamera diġitali sempliċi.Biex jiġi żgurat li kien hemm biżżejjed kampjun ta 'RNA jew DNA għall-analiżi, ir-riċerkaturi wettqu amplifikazzjoni tal-polimerażi recombinase (RPA), teknika sempliċi li topera f'temperatura kostanti ta' madwar 100 ° F.Huma żviluppaw pjattaforma ġdida msejħa s-Sensor tal-Aċidu Nukleiku Luminixxenti (LUNAS), li fiha ż-żewġ proteini CRISPR/Cas9 huma speċifiċi għal porzjonijiet kontigwi differenti tal-ġenoma virali, kull wieħed bi framment luciferase uniku mwaħħal magħhom hawn fuq.
Meta l-ġenoma virali speċifiku li l-investigaturi qed jeżaminaw ikun preżenti, żewġ proteini CRISPR/Cas9 jingħaqdu mas-sekwenza tal-aċidu nuklejku fil-mira;dawn isiru fil-viċin, li jippermettu li tifforma proteina luciferase intatta u jarmu dawl blu fil-preżenza ta 'sottostrat kimiku..Biex tagħti kont tas-sottostrat ikkunsmat f'dan il-proċess, ir-riċerkaturi użaw reazzjoni ta 'kontroll li ħarġet dawl aħdar.Tubu li jibdel il-kulur minn aħdar għal blu jindika riżultat pożittiv.
Ir-riċerkaturi ttestjaw il-pjattaforma tagħhom billi żviluppaw l-assaġġ RPA-LUNAS, li jiskopriSARS-CoV-2 RNAmingħajr iżolament tedious RNA, u wera l-prestazzjoni dijanjostika tiegħu fuq kampjuni tampuni nażofarinġi minnCOVID-19pazjenti.RPA-LUNAS skopra b'suċċess SARS-CoV-2 fi żmien 20 minuta f'kampjuni b'tagħbija virali RNA ta 'inqas 200 kopja/μL.
Ir-riċerkaturi jemmnu li l-analiżi tagħhom tista 'faċilment u effettivament tiskopri ħafna viruses oħra."RPA-LUNAS huwa attraenti għall-ittestjar tal-mard infettiv fil-punt tal-kura," kitbu.